MVD·스파이크 회수율 계산 실무 · Interference Test 통과 가이드

MVD (Maximum Valid Dilution)란

MVD는 시료의 최대 유효 희석배수입니다. 이 배수 이상으로 희석하면 실제 endotoxin이 시약의 감도(λ) 아래로 내려가 검출 불능이 됩니다.

• Endotoxin 한계값 (Limit): 검체별 약전 규정치 (예: WFI = 0.25 EU/mL, 주사제 = 5 EU/kg ÷ 인체 최대 용량)
• 검체 농도: 시료 원액 농도 (단위 일치 주의)
• λ: 사용 시약의 label sensitivity (KC0828 = 0.005 EU/mL, Gel-clot = 0.03~0.5)

계산 예시

WFI를 KC0828(λ = 0.005 EU/mL)로 시험할 경우:

MVD = 0.25 × 1 / 0.005 = 50배

스파이크 회수율(Positive Product Control · PPC)

USP <85> Section 8은 시료 매트릭스의 간섭 여부를 확인하기 위해 PPC(스파이크 시험)를 요구합니다.

• 합격 기준: 50 < Recovery < 200 %
• 추천 스파이크 농도: 0.5 EU/mL 또는 2λ (Kinetic 계열)
• 각 희석 단계(원액 · 1:10 · 1:20 · 1:40) 별 병행 시험 권장

계산 예시

• Unspiked: 0.02 EU/mL
• Spiked: 0.42 EU/mL
• Recovery = (0.42 − 0.02) / 0.5 × 100 = 80 % → 합격

회수율 실패 시 대응 순서

1. 더 큰 희석으로 재시험 (MVD 이내) — 매트릭스 간섭 완화로 회수율 회복
2. 시약 방식 변경 — End-point → Kinetic Chromogenic(KC0828 λ 0.005)이 간섭 완충 우수
3. 재조합 시약 전환 — β-glucan 간섭이면 rFC (RFC96TS) · rCR로 완전 회피
4. 시료 전처리 — pH 조정(Tris) · EDTA 킬레이터 제거 · 계면활성제 최적화
5. BIOENDO LER Solution Kit — 강한 LER 매트릭스 (세포치료 등) 전용

LER (Low Endotoxin Recovery) 매트릭스 실제 사례

세포치료 원자재·단백질 제형·계면활성제 함유 시료는 회수율이 원액에서 <25%로 나오는 경우가 흔합니다.

희석	일반 시료	LER 매트릭스	대응
원액	80~120%	0~30%	재시험 (희석)
1:10	90~110%	1~10%	희석 ↑
1:20	95~105%	8~50%	희석 ↑
1:40	—	50~130% → 합격	✔